Животных  содержали в течение 90  дней в  отдельных боксах блока № 3 Вышневолоцкого отдела ВИЭВ. Через 15 дней после заражения была проведена туберкулинизация морских свинок согласно узаконенной методики. Убивали животных через 21 и 90 дней после заражения, с последующим вскрытием и взятием патологического материала для гистологических, бактериологических и ПЦР исследований.

      Во  втором опыте использовали 320 морских свинок, которых разделили на группы по 80 голов.

      Животных  первой группы (80 голов) подразделили на 4 подгруппы (по 20 голов). Первой подгруппе   ввели культуру M.kansasii подкожно в дозе 1 мг/мл,   второй  - внутрибрюшинно   в той же дозе и третьей - интратестикулярно в дозе 1 мг в 0,2 мл физиологического раствора, 4 подгруппа была контролем. Аналогичными методами и дозами заразили вторую, третью и четвертую подгруппы морских свинок культурами M.fortuitum,  M.xenopi  и M.bovis  соответственно.

      Через 10, 20, 30 и 60 дней после заражения убивали   по  5 морских свинок, с последующим  взятием патологического материала  для патоморфологических и  бактериологических исследований.

      В третьем опыте  использовали 32 кролика, которые были  разделены на 8 групп. Первая группа была заражена   M.phlei, вторая - M.smegmatis, третья  - M.bovis, четвертая - M.tuberculosis, пятая - M.avium – все в дозе по 1мг/мл. В шестой группе животных заражали  M.phlei, в седьмой - M.smegmatis – увеличив заражающую дозу до 10мг/мл, восьмая группа служила контролем. Аллергическое исследование было проведено через 15 дней после заражения, согласно существующей методике.

      Животных  убивали через 21 и 90 дней после заражения, с последующим взятием патологического материала для патоморфологических, бактериологических  и ПЦР исследований.

      В четвертом  опыте    были взяты   42 курицы, которых   разделили на 7 групп и заразили внутривенно в дозе по 1 мг/мл. Первую группу - M.phlei, вторую - M.smegmatis, третью -  M.tuberculosis, четвертую -  M.avium, пятая – контроль. Аналогичные две группы кур (шестую и седьмую) заразили десятикратной дозой M.phlei и M.smegmatis соответственно. Через 15 дней после заражения кур подвергли аллергическому исследованию по общепринятым методикам.

      Птицу убивали через 21 и 90 дней после заражения  с последующим исследованием  патологического материала патоморфологическим, бактериологическим и ПЦР методами.

      В пятом комплексном опыте,  который провели совместно с аспирантом  лаборатории микобактериозов   В.И.Строгоновым на 12 козах в возрасте 1 года, животных  разделили на 4 группы по 3 головы.

      Первую  группу животных (№ 1,2,3) заразили орально  вначале взвесью патологического материала павшей от туберкулеза курицы (печень, селезенка) и павшего кролика (печень, селезенка), которые ранее были заражены культурой M.avium (шт. К). Затем через 18 дней каждой козе так же орально ввели взвесь культуры M.avium (шт. К) в дозе 1 мг на кг живой массы.

      Вторая  группа (№ 4,5,6) была заражена орально  M.bovis. Сначала каждой козе вводили через зонд суспензию печени и селезенки одной морской свинки, павшей от генерализованной формы туберкулеза и суспендированные печень и селезенку одного кролика с аналогичными поражениями. Через 18 дней каждую козу так же орально заражали культурой M.bovis (шт. «С») в дозе 1 мг на 1 кг живой массы.

      Третью  группу коз (№ 7,8,9) заражали аналогично M.tuberculosis. Первоначально взвесью материала павшей от туберкулеза морской свинки (селезенка, печень), ранее зараженной культурой  M.tuberculosis (штамм Н37Rv). Через 18 дней каждая коза была заражена повторно орально этой же культурой в дозе 1мг на 1 кг живой массы.

      Четвертая группа животных (№ 10, 16, 17)  была  контрольной.

      Животных  содержали  в отдельных боксах в течение 9 месяцев. Одна коза пала  через 2,5 месяца, остальные животные убиты по окончанию опыта.

      Животных  в процессе опыта через каждые 30 – 60 дней исследовали пальпебральной туберкулиновой пробой, ППД-туберкулин вводили в нижнее веко глаза,  отступя от его края 1,5 – 2 см.

      Для бактериологического исследования патматериал обрабатывали по методу А.П.Аликаевой, с последующим посевом  на среды ФАСТ-ЗЛ и Левенштейна-Йенсена. От 210 животных материал обрабатывала кандидат ветеринарных наук Н.Г.Толстенко, а от 15 животных - самостоятельно. Из этого же центрифугата (при обработке материала по Аликаевой) брали пробы для ПЦР – исследований, которые были проведены  научным сотрудником  М.С.Калмыковой и  кандидатом  ветеринарных  наук Е.П.Вангели.

      При проведении гистологических исследований использовали «Методические указания по патогистологической технике»  (Москва, 2005).  Кусочки органов  и тканей фиксировали в 10 % растворе формалина. Гистологические препараты  были изготовлены методом заливки в целлоидин и парафин.  В ходе  гистологических  исследований использовали стандартный метод  окраски гематоксилин-эозином, а также сложные окраски: на соединительную ткань по Ван-Гизону и по Маллори, на выявление микобактерий в срезах по  Циль-Нильсену. Работа была проведена при консультативной помощи кандидатов  ветеринарных наук О.В.Якушевой и В.С.Суворова.

     

2.2. Результаты исследований. 

2.2.1. Результаты изучения  в динамике патологоанатомических  и патоморфологических  изменений у морских свинок, зараженных подкожно разными дозами M.phlei, M.smegmatis, M.avium в сравнении с M.tuberculosis и M.bovis. 

      На 21 день патоморфологические изменения  у морских свинок,  вызванные  M.bovis и M.tuberculosis,  характеризовались образованием язвы на месте введения, дно которой было покрыто казеозными массами,  увеличением регионарных лимфатических узлов, с формированием некроза. Селезенка и печень увеличены,  с множеством серых милиарных узелков. В легких серые бугорки на фоне катарально-гнойной пневмонии. Трахеобронхиальные лимфоузлы увеличенные, плотные с участками некроза. Гистологически в паренхиматозных органах и лимфоузлах отмечали образование множественных гранулем с центральным некрозом и распадом ядер путем кариорексиса.

      У морских свинок, зараженных M.avium в дозе 10 мг/мл,  на 21 день на месте введения находили уплотнение подкожной клетчатки, увеличение регионарного  лимфатического узла. У одной свинки в селезенке гистологически находили единичные скопления из ретикулярного типа клеток, формирующих гранулему, в печени – пролиферацию клеток Купфера, лимфоидных и ретикулоэндотелиальных в виде мелких скоплений, в легких -  утолщение стенок альвеол за счет пролиферации клеток стромы.

      У морских свинок, зараженных M.phlei, M.smegmatis в дозе 10 мг/мл, и убитых на  21 день, на месте заражения обнаружен участок уплотнения, регионарный лимфоузел немного увеличен. Только гистологически: в печени отмечали не резко выраженную  пролиферацию гистиоцитов и лимфоидных клеток по  триадам, в селезенке гиперплазию фолликулов. В легких стенки альвеол утолщены за счет пролиферации ретикулярного типа клеток,  встречались и  небольшие очаги лимфоидной инфильтрации. К 90 дню  патанатомические и гистологические  изменения у животных отсутствовали.

      Все морские свинки, зараженные  M.bovis,  пали в течение месяца от генерализованной формы туберкулеза. Свинки, зараженные M.tuberculosis, убиты по окончанию опыта с генерализованной  формой туберкулеза. У животных, зараженных M.avium,  кроме некроза в месте заражения, иногда  обнаруживали увеличение селезенки, в печени и селезенке находили  единичные казеозные  узелки.

     Таким образом, морфологически реакция  у  морских свинок на заражение  M.phlei и M.smegmatis к 21 дню проявлялась пролиферацией ретикулоэндотелиальной стромы органы, а с удлинением срока содержания практически исчезала.   Изменения у  свинок, зараженных десятикратной дозой  M.avium, к 21 дню проявлялись в виде уплотнения в месте заражения, увеличения регионарного лимфатического узла и единичных узелков в печени и селезенке,  не имеющие тенденции к усугублению патологии, в отличие от патологии, вызванной M.tuberculosis и M.bovis. 

2.2.2. Патологоанатомические  и патоморфологические  изменения в динамике  у морских свинок, зараженных M.kansasii, M.fortuitum, M.xenopi подкожным, внутрибрюшинным и интратестикулярным методами.

      Изменения у животных, зараженных подкожно  нетуберкулезными микобактериями,  в начальные сроки были идентичны  с минимальной разницей в степени  выраженности по видам   микобактерий - это уплотнение в месте заражения размером с горошину, незначительное увеличение регионарного лимфатического узла и селезенки, а иногда  единичные узелки в печени. 

      При заражении интратестикулярно на ранних сроках отмечали увеличенный  и гиперемированный семенник, в который вводили культуру, увеличенный регионарный правый паховый лимфатический узел,  иногда  единичные узелки в печени.

      У свинок, зараженных внутрибрюшинно, иногда в брюшной полости содержалось  повышенное количество транссудата,  а стенка брюшины и сальник очагово уплотнены.  В печени и селезенке встречались единичные,  милиарные очажки. К 60 дню  у большинства животных изменений не обнаруживали. У отдельных особей обнаруживали в печени или селезенке единичные узелки. В то время  как у морских свинок, зараженных M.bovis, отмечали характерные туберкулезные изменения во всех органах.

      Высеваемость  культур  M.xenopi  и M.kansasii на ранних сроках составляла от 70 до 100 %, а с увеличением сроков содержания снижалась до 4 % .

      Полученные  результаты по сравнению в динамике патоморфологических  изменений в органах морских свинок, зараженных  нетуберкулезными  микобактериями подкожно, интратестикулярно и внутрибрюшинно, выявили однотипность морфологической реакции.  В месте введения культур, регионарных им лимфатических узлах и органах отмечены выраженные в разной степени альтеративные процессы  с   ранним инкапсулированием. В печени, селезенке и лимфатических узлах выявлена активация мезенхимальных элементов органов, выраженная  в пролиферации ретикулоэндотелиальных клеток. Эти процессы более выражены и дольше сохраняются при интратестикулярном и внутрибрюшинном заражении  M.kansasii и M.xenopi.

     Отмеченные  изменения характерны  для хронически текущих воспалений, в том числе  и туберкулеза. Однако отсутствие склонности к обострению процесса с формированием дочерних некрозов не позволяет провести полной аналогии с туберкулезной патологией.  

2.2.3. Патоморфологические    изменения у  кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis, в сравнении с зараженными M.tuberculosis, M.bovis и M.avium.

     Патоморфологические изменения у кроликов, зараженных M.phlei и M.smegmatis дозой 1мг/мл были незначительны и мало специфичны, а через 90 дней  отсутствовали. При увеличении заражающей дозы в 10 раз, к 21 дню в печени находили пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам, в легких - единичные лимфомы, в почках лимфоидную инфильтрацию. К 90 дню у большинства кроликов изменения редуцировались,  а у одного кролика в селезенке находили скопления эпителиоидных клеток, в легких единичные гранулемы, в почках единичные лимфомы, в печени пролиферацию ретикулоэндотелиальных и лимфоидных клеток по триадам.  Кролики, зараженные M.avium, пали от туберкулезного сепсиса, принятого как болезнь Йерсена, в течение месяца. Животные, зараженные M.bovis, пали с генерализованной формой туберкулеза. У кроликов, зараженных M.tuberculosis и убитых по окончанию опыта, находили единичные гранулемы в печени, легких и почках и очаги эпителиоидных клеток в селезенке.

 
 
 
 
 
 
 

2.2.4. Патоморфологические  изменения у кур, зараженных M.phlei, M.smegmatis и M.tuberculosis,  в сравнении с зараженными M.avium. 

      Куры, зараженные M.avium пали  в течение месяца от туберкулезного сепсиса. Селезенка и печень были резко увеличены, с четко выраженной зернистостью. На поверхности легких  множественные белые очаги. Гистологически структура печени, селезенки и легких плохо просматривалась из-за множественных  неограниченных, конгломерированных гранулем, состоящих из эпителиоидных клеток.

      При окраске срезов  по Циль-Нильсену выявлено обилие микобактерий в цитоплазме.

     У кур, зараженных M.tuberculosis, в дозе 10 мг/мл на  21 день после заражения отмечено незначительное увеличение селезенки, в легких единичные белесоватые узелки: гистологически гранулемы, состоящие из макрофагов, окруженные лимфоидными клетками, без тенденции к распаду. К 90 дню  данные изменения редуцировались,  у 2 кур гистологически находили единичные гранулемы с некрозом и инкапсуляцией в легких, печени и селезенке.

     В группе кур, зараженных 10 мг/мл M.phlei и M.smegmatis, к 21 дню после заражения гистологически у 2  особей   наблюдали в печени  лимфоидную пролиферацию, в селезенке – гиперплазию фолликулов.  У одной курицы в легком единичные узелки по ходу сосудов, состоящие из макрофагов с некрозом в центре, окруженные лимфоидными клетками.

     К 90 дню  у отдельных птиц при  вскрытии обнаружили в печени и селезенке  единичные белесоватые узелки. Гистологически  эти поражения представляли собой  некротизированные массы, состоящие из фибрина, и  небольшого количества распавшихся кариорексисом ядер. Некрозы окружены в одних случаях широкой зоной макрофагов типа эпителиоидных клеток, гигантских клеток с вытянутыми темно окрашенными ядрами. Некроз, соприкасающийся  с гигантскими клетками, подвергался рассасыванию путем вакуолизации.