Определение цитокинов

Содержание.

Введение.

1.Общая характеристика и классификация цитокинов.

1.1.Механизмы действия.

1.2Свойства цитокинов.

1.3Роль цитокинов в регуляции физиологических функций организма.

2.Особые исследования цитокинов.

2.1Значение цитокинов в патогенезе воспалительных заболеваний толстой кишки у детей.

2.2.Роль оксида азота и цитокинов в развитии синдрома острого повреждения легких.

3.Методы определения цитокинов

3.1.Определение биологической активности цитокинов

3.2.Количественное определение цитокинов с помощью антител

3.3.Определение цитокинов методом иммуноферментного анализа.

3.3.1Фактор некроза опухолей-альфа.

3.3.2Гамма-интерферон.

3.3.3Интерлейкин-4

3.3.4Интерлейкин-8

3.3.5Рецепторный антагонист интерлейкина-1.

3.3.6Альфа-интерферон.

3.3.7Антитела к альфа-ИНФ.

4.Иммунотропные препараты на основе цитокинов.

Список использованной литературы.

Заключение. 
 
 
 
 
 
 

Введение.

С момента описания первых цитокинов прошло немного  времени. Однако их исследование привело  к выделению обширного раздела  знаний - цитокинологии, являющейся неотъемлемой частью различных областей знания и, в первую очередь, иммунологии, давшей мощнейший толчок к изучению этих медиаторов. Цитокинология пронизывает  все клинические дисциплины, начиная  от этиологии и патогенеза заболеваний  и заканчивая профилактикой и  лечением различных патологических состояний. Следовательно, научным  исследователям и клиницистам необходимо ориентироваться в разнообразии регуляторных молекул и иметь  ясное представление о роли каждого  из цитокинов в изучаемых процессах.[2]                                                                      Все клетки иммунной системы имеют определенные функции и работают в четко согласованном взаимодействии, которое обеспечивается специальными биологически активными веществами - цитокинами - регуляторами иммунных реакций. Цитокинами назвали специфические белки, с помощью которых разнообразные клетки иммунной системы могут обмениваться друг с другом информацией и осуществлять координацию действий. Набор и количества цитокинов, действующих на рецепторы клеточной поверхности, - "цитокиновая среда" - представляют собой матрицу взаимодействующих и часто меняющихся сигналов. Эти сигналы носят сложный характер из-за большого разнообразия цитокиновых рецепторов и из-за того, что каждый из цитокинов может активировать или подавлять несколько процессов, включая свой собственный синтез и синтез других цитокинов, а также образование и появление на поверхности клеток цитокиновых рецепторов.[7] Целью нашей работы является изучение цитакинов, их функций и свойств, а так же возможное применение их в медицине.                                                                                                                       Цитокины - это небольшие белки (мол. масса от 8 до 80 КДа), действующие аутокринно (т.е. на клетку, которая их продуцирует) или паракринно (на клетки, расположенные вблизи). Образование и высвобождение этих высокоактивных молекул происходит кратковременно и жестко регулируется. 

Литературный  обзор.

Общая характеристика и  классификация цитокинов.

Цитокины представляют собой группу полипептидных медиаторов межклеточного взаимодействия, участвующих  главным образом в формировании и регуляции защитных реакций  организма при внедрении патогенов  и нарушении целостности тканей, а также в регуляции ряда нормальных физиологических функций. Цитокины могут быть выделены в новую самостоятельную  систему регуляции, существующую наряду с нервной и эндокринной системами  поддержания гомеостаза, причем, все  три системы тесно взаимосвязаны  и взаимозависимы. За последние два  десятилетия клонированы гены большинства  цитокинов и получены рекомбинантные аналоги, полностью повторяющие  биологические свойства природных  молекул. Сейчас известно уже более 200 индивидуальных веществ, относящихся  к семейству цитокинов. История  изучения цитокинов началась в 40-е  годы ХХ века. Именно тогда были описаны  первые эффекты кахектина – фактора, присутствовавшего в сыворотке  крови и способного вызывать кахексию или снижение веса тела. В дальнейшем данный медиатор удалось выделить и показать его идентичность фактору некроза опухолей (ФНО). В то время изучение цитокинов проходило по принципу обнаружения какого-либо одного биологического эффекта, служившего отправной точкой для названия соответствующего медиатора. Так в 50-е годы назвали интерферон (ИФН) из-за способности интерферировать или повышать сопротивляемость при повторной вирусной инфекции. Интерлейкин-1 (ИЛ-1) тоже вначале назывался эндогенным пирогеном в противовес бактериальным липополисахаридам, считавшимся экзогенными пирогенами. Следующий этап изучения цитокинов, относящийся к 60-70 годам, связан с очисткой природных молекул и всесторонней характеристикой их биологического действия. К этому времени относится открытие Т-клеточного ростового фактора, известного теперь как ИЛ-2, и целого ряда других молекул, стимулирующих рост и функциональную активность Т-, В-лимфоцитов и других типов лейкоцитов.  В 1979 году для их обозначения и систематизации был предложен термин «интерлейкины», то есть медиаторы, осуществляющие связь между лейкоцитами. Однако очень скоро выяснилось, что биологические эффекты цитокинов распространяются далеко за пределы иммунной системы, и поэтому более приемлемым стал ранее предложенный термин «цитокины», сохранившийся и по сей день. Революционный поворот в изучении цитокинов произошел в начале 80-х годов после клонирования генов интерферона мыши и человека и получения рекомбинантных молекул, полностью повторявших биологические свойства природных цитокинов. Вслед за этим удалось клонировать гены и других медиаторов из данного семейства. Важной вехой в истории цитокинов стало клиническое применение рекомбинантных интерферонов и особенно рекомбинантного ИЛ-2 для лечения рака. 90-е годы ознаменовались открытием субъединичного строения рецепторов цитокинов и формированием понятия «цитокиновая сеть», а начало XXI века - открытием многих новых цитокинов путем генетического анализа. К цитокинам относят интерфероны, колониестимулирующие факторы (КСФ), хемокины, трансформирующие ростовые факторы; фактор некроза опухолей; интерлейкины со сложившимися исторически порядковыми номерами и некоторые другие эндогенные медиаторы. Интерлейкины, имеющие порядковые номера, начиная с 1, не относятся к одной подгруппе цитокинов, связанных общностью функций. Они в свою очередь могут быть разделены на провоспалительные цитокины, ростовые и дифференцировочные факторы лимфоцитов, отдельные регуляторные цитокины. Название «интерлейкин» присваивается вновь открытому медиатору в том случае, если соблюдены следующие критерии, выработанные номенклатурным комитетом Международного союза иммунологических обществ: молекулярное клонирование и экспрессия гена изучаемого фактора, наличие уникальной нуклеотидной и соответствующей ей аминокислотной последовательности, получение нейтрализующих моноклональных антител. Кроме того новая молекула должна продуцироваться клетками иммунной системы (лимфоцитами, моноцитами или другими типами лейкоцитов), иметь важную биологическую функцию в регуляции иммунного ответа, а также дополнительные функции, из-за чего ей не может быть дано функциональное название. Наконец, перечисленные свойства нового интерлейкина должны быть опубликованы в рецензируемом научном издании. Классификация цитокинов может проводиться по их биохимическим и биологическим свойствам, а также по типам рецепторов, посредством которых цитокины осуществляют свои биологические функции. Классификация цитокинов по строению (Табл. 1) учитывает не только аминокислотную последовательность, но прежде всего третичную структуру белка, более точно отражающую эволюционное происхождение молекул.

Таблица 1. Классификация  цитокинов по строению.

Клонирование  генов и анализ строения рецепторов цитокинов показали, что также, как  и сами цитокины эти молекулы могут  быть разделены на несколько типов  согласно сходству аминокислотных последовательностей  и особенностям организации внеклеточных доменов (Табл. 2). Одно из наиболее крупных  семейств рецепторов цитокинов называется семейством гемопоэтиновых рецепторов или семейством цитокиновых рецепторов I типа. Особенностью строения этой группы рецепторов является наличие в молекуле 4 цистеинов и последовательности аминокислот Trp-Ser-X-Trp-Ser (WSXWS), расположенной  на небольшом расстоянии от клеточной мембраны. II класс цитокиновых рецепторов взаимодействует с интерферонами и с ИЛ-10. Оба первых типа рецепторов имеют гомологию друг с другом. Следующие группы рецепторов обеспечивают взаимодействие с цитокинами семейства фактора некроза опухолей и семейства ИЛ-1. В настоящее время известно более 20 различных рецепторов хемокинов, взаимодействующих с разной степенью аффинности с одним или несколькими лигандами хемокинового семейства. Рецепторы хемокинов принадлежат к суперсемейству родопсиновых рецепторов, имеют 7 трансмембранных доменов и проводят сигнал с участием G-белков.

[7]. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Таблица 2. Классификация  рецепторов цитокинов.

Многие рецепторы  цитокинов состоят из 2-3 субъединиц, кодируемых разными генами и экспрессируемых  независимо. При этом для формирования высокоаффинного рецептора требуется  одновременное взаимодействие всех субъединиц. Примером подобной организации  рецепторов цитокинов служит строение рецепторного комплекса ИЛ-2. Удивительным оказалось открытие того факта, что  отдельные субъединицы рецепторного комплекса ИЛ-2 являются общими для  ИЛ-2 и некоторых других цитокинов. Так, β-цепь является одновременно компонентом  рецептора для ИЛ-15, а γ-цепь служит общей субъединицей рецепторов для  ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ИЛ-9, ИЛ-15 и ИЛ-21. Это  означает, что все упомянутые цитокины, рецепторы которых также состоят  из 2-3 индивидуальных полипептидов, используют γ-цепь в качестве компонента своих  рецепторов, причем, компонента, ответственного за проведение сигнала. Во всех случаях  специфичность взаимодействия для  каждого цитокина обеспечивается другими  субъединицами, отличающимися по структуре. Среди рецепторов цитокинов существуют еще 2 общих рецепторных субъединицы, проводящих сигнал после взаимодействия с разными цитокинами. Это общая  рецепторная субъединица βc (gp140) для рецепторов ИЛ-3, ИЛ-5 и ГМ-КСФ, а также рецепторная субъединица gp130, общая для членов семейства ИЛ-6. Присутствие общей сигнальной субъединицы в рецепторах цитокинов служит одним из подходов для их классификации, так как позволяет найти общность как в строении лигандов, так и в биологических эффектах.

В таблице 3 приведена  объединенная структурно-функциональная классификация, где все цитокины разделены на группы, в первую очередь  с учетом их биологической активности, а также указанных выше особенностей строения молекул цитокинов и  их рецепторов.

Таблица 3. Структурно-функциональная классификация цитокинов.

Первая группа включает интерфероны I типа и является наиболее простой по организации, так  как все включенные в нее молекулы имеют сходное строение и во многом одинаковые функции, связанные с  противовирусной защитой. Во вторую группу вошли факторы роста и  дифференцировки гемопоэтических  клеток, стимулирующие развитие кроветворных клеток-предшественников, начиная от стволовой клетки. В эту группу включены цитокины, узко специфичные  для отдельных линий дифференцировки  кроветворных клеток (эритропоэтин, тромбопоэтин, а также ИЛ-7, действующий на предшественники  Т- В-лимфоцитов), а также цитокины с более широким спектром биологической  активности, такие как ИЛ-3, ИЛ-11, колониестимулирующие факторы. В составе этой группы цитокинов  выделены лиганды gp140, имеющие общую  рецепторную субъединицу, а также тромбопоэтин и эритропоэтин в силу сходства структурной организации молекул.  Цитокины суперсемейства ФРФ и ИЛ-1 имеют высокую степень гомологии и сходное строение белков, что подтверждает общность происхождения. Тем не менее, по проявлениям биологической активности ФРФ во многом отличается от агонистов семейства ИЛ-1. Семейство молекул ИЛ-1 в настоящее время кроме функциональных названий имеет обозначения F1-F11, где F1 соответствует ИЛ-1α, F2 - ИЛ-1β, F3 – рецепторному антагонисту ИЛ-1, F4 - ИЛ-18. Остальные члены семейства открыты в результате генетического анализа и обладают достаточно высокой гомологией с молекулами ИЛ-1, однако, их биологически функции полностью не выяснены.  Следующие группы цитокинов включают семейства ИЛ-6 (лиганды общей рецепторной субъединицы gp130), фактора некроза опухолей и хемокины, представленные наибольшим числом индивидуальных лигандов и перечисленные полностью в соответствующих главах. Семейство фактора некроза опухолей сформировано в основном на основании сходства в строении лигандов и их рецепторов, состоящих из трех нековалентно связанных одинаковых субъединиц, формирующих биологически активные молекулы. В то же время по биологическим свойствам в данное семейство включены цитокины с достаточно разными активностями. Например, ФНО является одним из наиболее ярких провоспалительных цитокинов, Fas-лиганд вызывает апоптоз клеток мишеней, а CD40-лиганд обеспечивает стимулирующий сигнал при межклеточном взаимодействии Т- и В-лимфоцитов. Такие различия в биологической активности структурно сходных молекул определяются в первую очередь особенностями экспрессии и строения их рецепторов, например наличием или отсутствием внутриклеточного домена «смерти», определяющего апоптоз клеток.  Семейства ИЛ-10 и ИЛ-12 в последние годы также пополнились новыми членами, получившими порядковые номера интерлейкинов. Далее следует очень сложная группа цитокинов, представляющая собой медиаторы функциональной активности Т-лимфоцитов хелперов. Включение в эту группу основано на двух основных принципах: 1) принадлежность к цитокинам, синтезируемым Тх1 или Тх2, что определяет развитие преимущественно гуморального или клеточного типа иммунологических реакций, 2) наличие общей рецепторной субъединицы – гамма цепи рецепторного комплекса ИЛ-2. Среди лигандов гамма цепи дополнительно выделен ИЛ-4, имеющий также общие рецепторные субъединицы с ИЛ-13, что во многом определяет частично перекрывающуюся биологическую активность этих цитокинов. Аналогично выделен ИЛ-7, имеющий общность строения рецепторов с ТСЛП.  Преимущества приведенной классификации связаны с одновременным учетом биологических и биохимических свойств цитокинов. Целесообразность такого подхода в настоящее время подтверждается открытием новых цитокинов путем генетического анализа генома и поиска структурно похожих генов. Благодаря этому методу существенно расширилось семейство интерферонов I типа, ИЛ-1, ИЛ-10, ИЛ-12, появилась новое семейство цитокинов аналогов ИЛ-17, уже состоящее из 6 членов. По-видимому в ближайшее время появление новых цитокинов будет происходить значительно медленнее, так как анализ генома человека практически закончен. Изменения скорее всего возможны за счет уточнения вариантов лиганд-рецепторных взаимодействий и биологических свойств, которые позволят классификации цитокинов прибрести окончательный вид. [5]