Подготовка инструментов и материалов для получения спермы и проведения искусственного осеменения

Тема: ПОДГОТОВКА ИНСТРУМЕНТОВ И МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕРМЫ И ПРОВЕДЕНИЯ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ

Цель: Освоить приготовление растворов, спиртовых тампонов и марлевых салфеток, обеззараживание инструментов и материалов.

1. Подготовка растворов, спиртовых тампонов и марлевых салфеток

Необходимые материалы: 96%-ный этиловый спирт, дистиллированная вода, цилиндр (градуированный, ёмкостью 100-200 мл), спиртометр, химически чистый натрия хлорид, на­трия гидрокарбонат, весы с разновесами, химические колбы ёмкостью 200 мл, стеклянные палочки, электроплитка, гигро­скопическая вата, марля и горячая вода.

1.1. Приготовление 70%-ного спирта

70%-ный спирт применяется в искусственном осемене­нии для обеззараживания стеклянных спермоприёмников, мик­рошприцев и шпрнцев-катетеров путём промывания их внут­ренней поверхности. Спирт такой концентрации обладает более сильными дезинфицирующими свойствами, чем 96%-ный. Это связано с тем, что 70%-ный спирт в меньшей степени способ­ствует коагуляции белка и поэтому глубже проникает в цито­плазму микробной клетки, вызывая её гибель.

Расчёт для приготовления 100 мл 70%-ного спирта из 96%-ного производится следующим образом:

96%-ный спирт - 100%

70%-ный спирт - X. следовательно  Х= 70*100/96 = 72,9

Таким образом, для приготовления 100 мл 70%ного спирта к 73 мл этилового спирта-ректификата добавляют 27 мл дистиллированной или прокипяченной воды и размешивают стеклянной палочкой. Крепость приготовленного спирта прове­ряют спиртометром.

Для смешивания 96%-ного спирта с водой следует поль­зоваться градуированным цилиндром. 70%-ный спирт обычно готовят на 2-3 дня работы и хранят в банке с притёртой крыш­кой.

На пунктах искусственного осеменения для промывания всей посуды и инструментов после стерилизации с целью уда­ления капель воды или спирта, а также для увлажнения сте­рильного влагалищного зеркала или разовых полиэтиленовых перчаток перед их использованием применяют какой-либо изо­тонический раствор: 0,9%-ньй раствор натрия хлорида, 1%-ный раствор натрия гидрокарбоната или 2,9%-ный раствор на­трия цитрата.

1.2. Приготовление 0,9%-ного раствора натрия хлорида

Нужный объем воды отмеряют в чистую колбу, высы­пают туда навеску натрия хлорида (на каждые 100 мл воды -0,9 г хлорида натрия). Если натрия хлорид в виде таблеток но 0,9 г, то берут 1 таблетку на каждые 100 мл воды. Колбу закры­вают ватно-марлевой пробкой, ставят на плитку и кипятят.

1.3.  Приготовление 1%-ного раствора натрия гидрокар­боната

Цилиндром или мензуркой отмеряют необходимое ко­личество дистиллированной или дважды прокипяченной и профильтрованной водопроводной воды и выливают её в стеклянную колбу. Волу кипятят и дают ей остыть до 60 С. Взве­шивают требуемое количество химически чистого натрия гид­рокарбоната (из расчета 1 г на 100 мл воды), высыпают в стерильную колбу, заливают подготовленной водой и размешивают стерильной стеклянной палочкой. Раствор натрия гидрокарбоната нельзя нагревать выше 60°С, т.к. он разлагается и стано­вится непригодным.

1.4. Приготовление 2,9%-ного раствора натрия цитрата

Для его приготовления на каждые 100 мл воды берут 2,9 г химически чистого натрия цитрата трёх замещенного пятиводного. Техника приготовления раствора аналогична приго­товлению 1 %-ного содового раствора.

Указанные выше растворы готовят ежедневно перед на­чалом работы, после охлаждения разливают в стерильные банки-тампонницы с притертыми крышками.

1.5.   Приготовление 2-3%-ного раствора натрия гидро­карбоната

Данный раствор в искусственном осеменении применя­ют для мытья использованных искусственных вагин и загряз­нённой посуды. Готовят его ежедневно в стеклянной или эма­лированной посуде. На каждый литр горячей воды берут 20-30 г двууглекислой (питьевой) соды. Можно применять также 1-1,5%-ный раствор кальцинированной соды (на литр горячей во­ды 10-15 г соды) или 2-3%-ный раствор (20-30 г на литр воды) одного из стиральных порошков.

1.6.   Приготовление  0,02%-ного  раствора  фурацилина (1:5000)

Раствор фурацилина применяют для обработки наруж­ных половых органов у самок перед осеменением, у производи­телей перед взятием спермы. Этот раствор готовят на изотоническом растворе натрия хлорида. В одном литре кипящей воды растворяют 9 г натрия хлорида и 0,2 г фурацилина. Раствор ох­лаждают и переливают в чистую бутыль из тёмного стекла. Ис­пользуют его в течение двух дней и хранят в затемнённом мес­те.

1.7. Приготовление спиртовых тампонов

Спиртовые тампоны в искусственном осеменении при­меняют для обеззараживания наружной поверхности шприцев-катетеров, химических термометров, подставок, полиэтиленовых пакетов с разовыми инструментами, рук и т.д. Тампоны го­товят из гироскопической ваты. Взяв кусок ваты, расслаивают его на тонкие пласты, отделяя от них небольшие кусочки, под­вёртывают края их так, чтобы получались плоские тампоны диаметром 5-6 см. Изготовленные ватные тампоны помещают в невысокую стеклянную банку (можно использовать крышку от банки для тампонов), аккуратно смачивают 96%-ным спиртом-ректификатом, отжимают и, отделяя по одному, складывают в стеклянную банку с притёртой крышкой. Тампоны можно гото­вить на 2-3 дня работы. Спиртовые тампоны, использованные для обеззараживания инструментов путём протирания поверхности, складывают в отдельную банку с притёртой крышкой и затем их используют еще раз для стерилизации методом фламбирования (обжигания не коптящим пламенем). 1.8. Приготовление марлевых салфеток

Стерильные марлевые салфетки применяют для завора­чивания стерильных инструментов, удаления из инструментов капель воды, для протирания предметных и покровных стёкол, а также оптики микроскопа и т, д. Марлю нарезают размером 20x30 или 30x30 см. Края салфеток подшивают. Загрязнённые салфетки стирают в тёплой воде с порошком, хорошо пропола­скивают, сушат и проглаживают горячим утюгом для обеззара­живания. Затем салфетки свёртывают вчетверо и складывают в стерильную стеклянную банку с притёртой крышкой.

2.   Обеззараживание инструментов и материалов

Необходимые материалы: спермоприёмник стеклянный, микрошприцы и шприцы-катетеры, влагалищные зеркала, стек­лянная посуда, электроплитка, водяная баня, стерилизатор, ва­зелин, спирт этиловый, пластмассовые инструменты, лампа бактерицидная, спиртовка. 1%-ный раствор натрия гидрокарбоната.

Используемые в искусственном осеменении посуда и ин­струменты должны быть стерильными. Перед обеззараживани­ем новые или бывшие в употреблении инструменты моют в го­рячем растворе соды, затем тщательно ополаскивают чистой горячей водой, протирают чистым полотенцем или высушива­ют на воздухе.

2.1. Стерилизация кипячением

Кипячением можно стерилизовать стеклянные и метал­лические инструменты.

Чистые стеклянные инструменты и посуду (шприцы-катетеры, тампонницы, стеклянные палочки и т. д.) в разобран­ном виде обёртывают марлей, помещают в стерилизатор (или эмалированную посуду) и заливают дистиллированной или прокипяченной и профильтрованной водой, закрывают крыш­кой и кипятят 15-20 минут. Затем дают остыть, не снимая крышки. Стерильным пинцетом инструменты извлекают из стерилизатора, встряхивают и завёртывают в стерильную мар­левую салфетку. Инструменты, которые соприкасаются со спермой (например, шприц-катетер), перед работой должны быть обязательно промыты 4-5 раз тёплым изотоническим рас­твором.

Металлические инструменты (влагалищные зеркала и др.) стерилизуют кипячением в течение 15-20 минут. После этого их необходимо просушить стерильными салфетками.

2.2. Стерилизация сухим паром

Стеклянную посуду и инструменты выдерживают в электрическом сушильном шкафу при температуре 150-180°С в течение 5-30 минут. Предварительно колбы, мензурки, баночки, флаконы, спермоприёмники. палочки заворачивают в бумагу, которая при обеззараживании должна не сгореть, а только слег­ка пожелтеть.

2.3. Стерилизация фламбированием

Металлические инструменты, особенно в полевых усло­виях, стерилизуют фламбированием. то есть обжиганием на некоптящем пламени. Инструменты несколько раз проводят над пламенем. Для фламбирования чаще всего используют тампо­ны, пропитанные 96%-ным спиртом-ректификатом.

2.4. Обеззараживание 70%-ным спиртом-ректификатом

Спермоприёмники и шприцы-катетеры можно обеззара­живать путём промывания 70%-ным спиртом. Для удаления ка­пель спирта, губительно влияющего на спермии, инструменты промывают 4-5 раз стерильным 1%-ным раствором натрия гид­рокарбоната (или другим изотоническим раствором).

2.5.  Автоклавированием можно обеззараживать инстру­менты, изготовленные из резины, металла, стекла и натураль­ных тканей. Продолжительность автоклавирования 30 минут при температуре 105°С и давлении 0,15 МПа 30-45 минут.

2.6. Облучение бактерицидной лампой

Ультрафиолетовые лучи губительно действуют на мик­роорганизмы, поэтому их используют для стерилизации одно­разовых инструментов, боксов, лабораторий. Время экспозиции 30 минут. Находиться в помещении при включенной лампе нельзя.

2.7. Стерилизация вазелина

Стерильный вазелин применяют для смазывания камеры искусственной вагины при её подготовке для получения спер­мы. С этой целью применяют белый или желтый вазелин без примеси. Вазелин стерилизуют перед каждым получением спермы. В водяную баню на дно кладут ватную или марлевую подкладку, наливают воду и помещают баночку с вазелином с не плотно прикрытой крышкой. Водяную баню нагревают до кипения и кипятят в течение 20 минут. Затем баночку с вазели­ном вынимают и охлаждают.