Микрофлора полости рта

В первые месяцы жизни ребенка в полости рта  преобладают аэробы и факультативные анаэробы. Это связано с отсутствием  у детей зубного ряда, необходимого для существования строгих анаэробов. Среди микроорганизмов, обитающих  в этот период в полости рта, преобладают стрептококки, преимущественно S. salivarius, лактобактерии, нейссерии, гемофиллы и грибы рода Candida, максимум которых приходится на 4 месяце жизни. В складках слизистой оболочки полости рта могут вегетировать незначительные количества анаэробов -вейлонеллы и фузобактерии. Прорезывание зубов способствует резкому изменению качественного состава микроорганизмов, которое характеризуется появлением и быстрым нарастанием количества строгих анаэробов. Одновременно происходит распределение микроорганизмов и "заселение" ими полости рта в соответствии с особенностями анатомического строения. При этом образуются многочисленные микроэкосистемы с относительно стабильными микробными популяциями. Спирохеты и бактероиды появляются в полости рта лишь к

14   годам,   что   связано   с   возрастными   сдвигами   в гормональном фоне организма. 

Идентификация представителей нормофлоры полости рта. 

ЛАКТОБАКТЕРИИ. Род Lactobacillus Палочковидные бактерии, неподвижные, спор не образуют, грамположительны, факультативные анаэробы, хемоорганотрофы.

На кровяном агаре образуют серые колонии, или  мелкие, окруженные зоной альфа - гемолиза колонии. Биохимические свойства: ферментируют глюкозу, фруктозу, галактозу, мальтозу, сорбит с образованием молочной кислоты. Нитраты не восстанавливают, желатин не разжижает, индол и сероводород на образует.

В полости рта: L. casei, L. acidophilus, L. yermentum, L. salivarius.

СТРЕПТОКОККИ.   Семейство   Streptococcaceae,   род Streptococcus.

Грамположительные кокки, располагающиеся в мазках короткими или длинными цепочками.

По виду гемолиза на 5% кровяном агаре стрептококки делятся  на 3 группы:

           1.  Гемолитические стрептококки, вызывающие полный лизис эритроцитов с                прозрачной зоной гемолиза. Колонии могут быть:

           а) мукоидные, крупные, блестящие в диаметре 1,5 -2,5мм., напоминающие капельки росы. Данный вид колоний характерен для капсульных штаммов S. pyogenus.

           б) шероховатые, до 2,5 мм. в диаметре серо-белого цвета с приподнятым центром. Этот вид колоний характерен для штаммов, содержащих М - протеин.

           в) гладкие, мелкие, до 1,5 мм. в диаметре сферической формы, блестящие.

           2. Зеленящие стрептококки - образуют на 55 кровяном агаре полупрозрачную, зеленоватого цвета зону гемолиза. Колонии мелкие, до 1,5 мм. в диаметре, серовато-зеленоватого цвета с гладкой, либо шероховатой

поверхностью.   Этот   тип   колоний   характерен   для S. salivarius, S. sanguis.

           3. Негемолитические стрептококки - не реагируют с эритроцитами, не вызывают гемолиза.

После микроскопического  изучения, производят пересев колоний  в питательный бульон с сывороткой (10%) или глюкозой (0,2%). Инкубируют при  температуре 37 °С , 24 часа.

На следующий  день учитывают характер роста стрептококков  в жидкой питательной среде, делают мазки, окрашивают по Граму. Характер роста может быть различным:

а) придонно-пристеночный рост с образованием мелко-крошковатого осадка и сохранением прозрачности среды. Микроскопически выявляются длинные цепочки грамположительных  кокков.

б) придонный  рост в виде пушистого, рыхлого осадка с сохранением прозрачности среды  или помутнением надосадочного  слоя. Микроскопически выявляются цепочки  грамположительных кокков, с уменьшением  длины цепочек возрастает наклонность  к диффузному росту.

в) диффузный  рост с интенсивным помутнением  бульона и образованием гомогенного  осадка. Идентификацию культур гемолитического  стрептококка осуществляют на третий день исследования по методу Ленсфильда. Принцип метода: образование видимого преципитата в результате взаимодействия группоспецифического полисахарида "С" с соответствующими ему антителами группоспецифической антистрептококковой сыворотки. 

Дифференциальные признаки стрептококков. 

 

СТАФИЛОКОККИ.   Семейство  Micrococcaceae,  род Staphylococcus Грамположительные кокки, располагаются в мазках скоплениями. Колонии гладкие, блестящие, от белого до ярко-желтого цвета. При росте на 5% кровяном агаре большинство штаммов S. aureus и некоторые штаммы S. epidermidis образуют вокруг колоний зону гемолиза.

На следующих  этапах выделяют чистую культуру и  проводят видовую идентификацию  выделенных стафилококков.

Для установления принадлежности культур к семейству Micrococcaceae используют тест на каталазу. Представители данного семейства имеют фермент каталазу и способны расщеплять 3% перекись водорода на воду и газообразный кислород.

Установление  принадлежности культуры к роду Staphylococcus проводят по культуральным (колонии на ЖСА от белого до ярко-желтого цвета, на кровяном агаре зона гемолиза), морфологическим (грамположительные кокки, располагающиеся одиночно, парами, но чаще скоплениями в виде " гроздьев винограда"), биохимическим (ферментация глюкозы в анаэробных условиях) свойствам. На последнем этапе устанавливают видовую принадлежность стафилококков.

Штаммы S. aureus вырабатывают плазмокоагулазу, ДНК-азу, способны ферментировать маннит в анаэробных условиях. В большинстве случаев штаммы S. aureus обладают ферментом, лецитиназой, гемолизином.

Для штаммов  S. epidermidis характерны: чувствительность к новобиоцину, наличие фосфатазы, неспособность окислять маннит. Некоторые штаммы обладают пигментом, лецитиназой, гемолизином.

Штаммы S. saprophyticus обладают противоположными свойствами: нечувствительны к новобиоцину, не имеют фосфатазы, способны окислять маннит.

Поскольку не все  стафилококки по своим характеристикам  укладываются в указанную схему, такие штаммы следует обозначать Staphylococcus spp.

МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ГРИБЫ. Колонии грибов рода Candida- белые, блестящие, выпуклые с гладкой или морщинистой поверхностью. Могут иметь розовый или кремовый цвет. Микроскопически обнаруживаются крупные овальные почкующиеся клетки, грамположительные. Для выявления филаментации грибов рода Candida производят посев чистой культуры на картофельный агар. Биохимическую идентификацию проводят на основании способности штаммов ферментировать глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу.

Семейство     Bacteriodaceae    включает     три     рода: Bacterioides, Fusobacterium, Leptotrichia.

БАКТЕРИОИДЫ. К  роду Bacterioides относятся полиморфные, мелкие, грамотрицательные палочки, чаще с биполярной окраской. Спор не образуют, строгие анаэробы. Внешне колонии бактероидов бывают различными: мелкие, плоские, непрозрачные, серовато-белые с ровными краями, светло-коричневые средних размеров, желтовато-белые, непрозрачные, выпуклые, с

зазубренными  краями. Нередко обращает на себя внимание отвратительный запах при росте  бактериоидов на питательных средах. На кровяном агаре образуют колонии черного цвета растут в 20% желчи. В сахарном бульоне образует помутнение,

Наиболее часто  в полости рта встречается  В. oralis. Штаммы В. oralis на среде с кровью образуют колонии полупрозрачные, гладкие, гемолиз отсутствует. Интенсивно сбраживает углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу) с образованием янтарной кислоты. Не обладают уреазой, выделяют индол, не образуют сероводород.

ФУЗОБАКТЕРИИ. К  роду Fusobacterium относятся грамотрицательные, тонкие, нитевидные палочки с заостренными концами, могут располагаться цепочками, облигатные анаэробы. Хемоорганотрофы. Растут на кровяном агаре. Колонии мелкие, желтые, окруженные зоной альфа-гемолиза. Ферментируют глюкозу, образуют сероводород, индол, обычно каталазоотрицательны. Типовой вид – F. nucleatum, обитатели ротовой полости.

ЛЕПТОТРИХИИ - род  Leptotrichia. Прямые и слегка изогнутые палочки, располагающиеся цепочками, грамотрицательные. Неподвижны. Строгие анаэробы, гетеротрофы. Растут на средах с добавлением сыворотки, асцитической жидкости, крахмала, в атмосфере 55 СО2. Ферментируют глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу до кислоты. В полости рта наиболее часто встречается L. buccalis.

ВЕЙЛОНЕЛЛЫ - относятся  к роду Veillonella. Мелкие грамотрицательные кокки, неподвижны, спор не образуют, располагаются в мазках парами или короткими цепочками. Строгие анаэробы. Хемоорганотрофы. Растут на средах содержащих лактат, рН 6,5-8,0. Колонии мелкие, гладкие, маслянистые, серовато-белого цвета. Углеводы не

ферментируют, желатин  не разжижают, индол не образуют, гемолитическими свойствами не обладают, восстанавливают нитраты в нитриты.

НЕЙССЕРИИ - род  Neisseria. Бобовидные кокки, грамотрицательные, располагаются парами или небольшими скоплениями. Неподвижны. Аэробы или факультативные анаэробы. Растут на МПА с добавлением крови или сыворотки. Колонии светлые, полупрозрачные. Биохимически малоактивны (расщепляют глюкозу и мальтозу). Обладают цитохромоксидазой и каталазой.

КОРИНЕБАКТЕРИИ - относятся к роду Corynebacterium. Прямые или слегка изогнутые, грамположительные палочки, располагаются в виде частокола. Спор не образуют, не подвижны. Факультативные анаэробы. На питательных средах с теллуритом калия образуют серовато-белые и колонии. Растут на кровяных и сывороточных средах. В полости рта встречается C. hofmani..

Семейство Spirochaetaceae - в полости рта обнаружены:

1.Treponema denticola - тонкие спиральные клетки, на концах изогнуты, подвижны. Растут на средах с пептоном, дрожжевым экстрактом, сывороткой - в анаэробных условиях 2 недели. Колонии белые, диффузные. Стимулирует рост добавление в среду кокарбоксилазы. Углеводы не ферментируют, сероводород, индол образуют. Гидролизируют крахмал, гликоген, эскулен, желатин. Обнаружены в полости рта людей и шимпанзе а также в местах соединения зубов с деснами.

2. Treponema orale- тонкие, спиральные клетки, образующие цепочки. Подвижны. Растут на средах с пептоном и дрожжевым экстрактом. Среда также должна содержать глюкозу, цистеин, кокарбоксилазу, кроличью

сыворотку. В  жидкой среде вызывают равномерное помутнение. Углеводы не ферментируют, но ферментируют аминокислоты, образуют индол и сероводород. Обнаруживаются в десневых карманах людей.

3. Treponema macrodentinum - тонкие спиральные клетки с заостренными концами. Подвижны. Растут на средах, содержащих пептон, дрожжевой экстракт, 10% кокарбоксилазу, глюкозу, цистеин. Углеводы ферментируют и используют как источники энергии. Расщепляют глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу до кислоты. Не образуют индола, образуют сероводород. Обнаруживаются в десневых карманах людей.  

Микробная обремененность полости  рта, КО-Е/ед.суб.