Микробиология

Кемеровская            государственная            медицинская          академия 
 

                Кафедра микробиологии, вирусологии  и иммунологии 
 
 
 
 
 

                                       Контрольная работа по микробиологии   №1  
 
 

  Вариант  №4

  фармацевтический  факультет 

  заочное  отделение

  3 курс, 1 группа

  Номер зачетной  книжки;08004

                                                                                               652707

                                                                                          г. Киселевск

                                                                                 ул. Обогатителей 26

                                                                          Лежневой Анастасии Олеговны

1.Световые  микроскопы, их назначение. Микроскопия мазков  с иммерсионной  системой, техника  и значение.

Микроскоп –  это оптический прибор, имеющий не менее чем двухступенчатое увеличение предназначенный для исследования увеличенных изображений микрообъектов, которые невидны невооруженным глазом с расстояния 250 мм. Для светового микроскопирования чаще всего используют приборы МБИ-1, МБИ-2, обеспечивающие увеличение изображаемого объекта в 600 раз и более.

Основными частями светового микроскопа являются объектив и окуляр, заключенные в цилиндрический корпус – тубус. Большинство моделей, предназначенных для биологических исследований, имеют в комплекте три объектива с разными фокусными расстояниями и поворотный механизм, предназначенный для их быстрой смены – турель, часто называемую револьверной головкой. Тубус располагается на верхней части массивного штатива, включающего тубусодержатель. Чуть ниже объектива (или турели с несколькими объективами) находится предметный столик, на который устанавливаются предметные стекла с исследуемыми образцами. Резкость регулируется с помощью винта грубой и точной настройки, который позволяет изменять положение предметного столика относительно объектива. Для того чтобы исследуемый образец имел достаточную для комфортного наблюдения яркость, микроскопы снабжаются еще двумя оптическими блоками – осветителем и конденсором. Осветитель создает поток света, освещающий исследуемый препарат. В классических световых микроскопах конструкция осветителя (встроенного или внешнего) предполагает низковольтную лампу с толстой нитью накала, собирающую линзу и диафрагму, изменяющую диаметр светового пятна на образце. Конденсор, представляющий собой собирающую линзу, предназначен для фокусировки лучей осветителя на образце. Конденсор также имеет ирисовую диафрагму (полевую и апертурную), с помощью которой регулируется интенсивность освещения.

При работе с  пропускающими свет объектами (жидкостями, тонкими срезами растений и т. п.), их освещают проходящим светом – осветитель и конденсор располагаются под предметным столиком. Непрозрачные же образцы нужно освещать спереди. Для этого осветитель располагают над предметным столиком, и его лучи с помощью полупрозрачного зеркала направляются на объект через объектив.

Осветитель может  быть пассивным, активным (лампа) или  состоять из обоих элементов. Самые  простые микроскопы не имеют ламп для подсветки образцов. Под столиком у них располагается двустороннее зеркало, у которого одна сторона плоская, а другая – вогнутая. При дневном освещении, если микроскоп стоит у окна, получить довольно неплохое освещение можно при помощи вогнутого зеркала. Если же микроскоп находится в темном помещении, для подсветки используются плоское зеркало и внешний осветитель. Увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива и окуляра. При увеличении окуляра равном 10 и увеличении объектива равном 40 общий коэффициент увеличения равен 400. Обычно в комплект исследовательского микроскопа входят объективы с увеличением от 4 до 100. Типичный комплект объективов микроскопа для любительских и учебных исследований (х 4, х10 и х 40), обеспечивает увеличение от 40 до 400.Разрешающая способность – другая важнейшая характеристика микроскопа, определяющая его качество и четкость формируемого им изображения. Чем больше разрешающая способность, тем больше мелких деталей можно рассмотреть при сильном увеличении. В связи с разрешающей способностью говорят о «полезном» и «бесполезном» увеличении. «Полезным» называется предельное увеличение, при котором обеспечивается максимальная деталировка изображения. Дальнейшее увеличение («бесполезное») не поддерживается разрешающей способностью микроскопа и не выявляет новых деталей, зато может негативно повлиять на четкость и контраст изображения. Таким образом, предел полезного увеличения светового микроскопа ограничивается не общим коэффициентом увеличения объектива и окуляра - его при желании можно сделать сколь угодно большим, - а качеством оптических компонентов микроскопа, то есть, разрешающей способностью.

Иммерсионная система (от позднелат. immersio — погружение), оптическая система, в которой пространство между предметом и первой линзой заполнено иммерсионной жидкостью Имерсионные системы применяются в микроскопах. В качестве иммерсионных жидкостей применяют кедровое или минеральное масло (показатель преломления 1,515); водный раствор глицерина (1,434); воду (1,333); монобромнафталин (1,656); вазелиновое масло (1,503); йодистый метилен (1,741). Включение объектива в состав имерсионной системы даёт возможность повысить его апертуру А, а следовательно, и разрешающую способность микроскопа. "Сухая" система не может иметь А > 1, у масляных имерсионных систем А достигает 1,3, у монобромнафталиновой — 1,6. В имерсионных системах  уменьшается рассеяние света и тем самым увеличивается контраст изображения. Это особенно важно при исследовании слабо отражающих объектов.Имерсионные системы позволяют исследовать объекты, находящиеся на разной глубине в иммерсионной жидкости, путём погружения в неё объектива. Например, с объективом, рассчитанным на водную иммерсию, можно наблюдать микроорганизмы в воде. При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго придерживаться определенного порядка в работе:

1. на приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;
2. повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива Х90;
3. осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;
4. установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;
5. провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.

По окончании работы с микроскопом необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив Х8. 

2.Понятие  о клоне, штамме, чистой культуре микроорганизмов.

Культура - это видимая глазом совокупность бактерий на питательных средах. Культуры могут быть чистыми и смешанными (совокупность бактерий двух или более видов). Чи́стая культу́ра — культура микроорганизмов, состоящая только из одного вида организмов Чистые культуры используются  в микробиологической промышленности в качестве исходного материала для получения ферментов, вакцин, антибиотиков, витаминов, стероидных гормонов и других продуктов

Штамм - это чистая культура микроорганизмов, выделенных из определенного источника. Штаммы различаются по некоторым признакам, не выходящим за пределы характеристики вида.

Клон - это совокупность бактерий, являющихся потомством одной клетки. 
 

3.Морфология  хламидий, размножение,  методы культивирования,  роль в патологии

класс Rickcttsias

порядок Chlamydiales

семейство Chlamydiaceae

род Chlamydia

виды: trachomatis, Ch. psittaci, Ch. pneumoniae, Ch. pecorum

Вид Ch. trachomatis объединяет микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом у человека (антропонозные хламидиозы). Патогенные для человека Ch.trachomatis разделены на 3 биовара - возбудители венерической лимфогранулемы, возбудители гиперэндемической трахомы, возбудители спорадических заболеваний глаз (паратрахома, конъюнктивит с включениями у новорожденных и взрослых) и урогенитального хламидиоза (НГУ, цервициты, сальпингиты, проктиты, простатиты, эпидидимиты, пневмонии новорожденных)

Хламидия- внутриклеточный  облигатный паразит

Культивируется  в куриных эмбрионах, культурах  клеток конъюнктивы глаза. Размножаясь  в клетках эпителия роговицы глаза, образует включения – тельца Провацека, окрашивается по Романовскому- Гимзе в фиолетово Хламидии имеют шаровидную, овоидную или палочковидную форму. Их размеры колеблются в пределах 0,2—1,5 мкм. Морфология и размеры хламидии зависят от стадии их внутриклеточного цикла развития, для которого характерно превращение небольшого шаровидного элементарного образования в крупное инициальное тельце с бинарным делением. Перед делением частицы хламидии обволакиваются образованием, напоминающим бактериальную капсулу. Хламидии окрашиваются по Романовскому—Гимзе, грамотрицательны, хорошо видны в прижизненных препаратах при фазово-контрастной микроскопии.

Хламидии относятся  к микроорганизмам занимающим промежуточное  положение между вирусами и риккетсиями, с бактериями их объединяет аналогичное строение клеточной стенки и возможность окраски их по Грамму зрелых особей , а с вирусами то, что хламидии являются облигатными внутриклеточными паразитами с уникальным циклом развития. Сущность этого цикла заключается в том, что паразит проходит две различные по морфологии и биологическим свойствам формы существования микроорганизма, которые обозначаются как элементарные и ретикулярные (инициальные) тельца. Элементарное тельце высокоинфекционная форма возбудителя адаптированная к внеклеточному существованию. Ретикулярное тельце форма внутриклеточного существования паразита, очень лабильная вне клеток хозяина, метаболически активная, обеспечивающая репродукцию микроорганизма. Элементарное тельце прикрепляется к поверхности клетки мишени и фагоцитируется. В начальной стадии инфицирования элементарное тельце становится инициальным, при этом в нем увеличивается количество рибосом и полирибосом, четко обнаруживается бактериальный нуклеоид, возрастает величина этой формы возбудителя и появляются формы бинарного деления. Все эти процессы протекают внутри вакуоли клетки хозяина, где происходит накопление инициальных телец. Размер ретикулярных телец колеблется от 500 до 700 нм, элементарные тельца имеют меньший размер поперечник около 200 нм. Известно, что одно элементарное тельце может давать от 200 до 1000 "инфекционных единиц". Начальная фаза цикла развития продолжается 18-24 часа, после чего инициальные тельца (вегетативная форма) образует многочисленные элементарные тельца(споровая форма либо путем эндоспоруляции, либо путем отпочковывания которые затем освобождаются из фагосомы и мембраноограниченной зоны и инфицируют другие клетки. Время необходимое для полного цикла развития, составляет 24-48 часов, в зависимости от условий паразитирования. Возбудитель персистирует в клетке мишени весь цикл развития, пока не наступит разрушение клетки в результате гибели или ее локального повреждения в каком либо участке плазматической мембраны.

На основе этого  уникального цикла развития эти микроорганизмы по предложению юридической комиссии Международной ассоциации микробиологических обществ (МАМО) от 1.01.80 г. выделены в самостоятельный порядок, включающий одно семейство, куда входит один род, объединяющий два вида:

Возбудитель хламидиоза тропен к цилиндрическому эпителию выстилающему уретру, цервикальный канал и полость матки. Однако по данным последних исследований проведенных И.И.Ильиным, В.В.Делекторским, совместно с Н.П.Евстигнеевой получены доказательства поражения и многослойного плоского эпителия слизистой влагалища и прямой кишки.

 Наиболее  распространенными материалами  для выявления хламидий являются  мазки-соскобы из уретры и цервикального  канала у женщин и из уретры  у мужчин. Однако в настоящее  время исследуются и другие материалы, такие как первая порция мочи, отделяемое влагалища. У новорожденных детей материал берется из носоглотки, из гортани и из конъюнктивы. Метод ИФА для выявления антигенов хламидий не имеет широкого применения в практике, так как дает большое количество ложноположительных результатов и нуждается в применении подтверждающих или дополнительных тестов. Однако этот метод может применяться для исследования ректальных и назофарингеальных образцов, микроскопирование которых затруднено.  Пути передачи трансплацентарный, контактно—бытовой, половой.  

4.Методы  индикации и культивирование  вирусов

а)Культивирование вирусов в организме лабораторных животных .

Выбор экспериментальных  животных определяется целью работы и видовой чувствительностью  к изучаемому вирусу. Для заражения используют обезьян, кроликов, морских свинок, хомячков, белых крыс и мышей. 
Лабораторных животных заражают различными способами в зависимости от тропизма вируса к определенным тканям. Так, например, для культивирования нейротропных вирусов заражение производят преимущественно в мозг (вирусы бешенства, клещевого энцефалита и др.), культивирование респираторных вирусов осуществляется при интраназальном инфицировании животных (вирусы гриппа), дерматотропных (вирус оспы) - путем накожного и внутрикожного заражения. Наиболее часто используются накожное, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное и внутримозговое заражение. 
При первичном заражении животные могут не заболеть, поэтому через 5-7 дней внешне здоровых животных убивают, а из их органов готовят суспензии, которыми заражают следующие партии животных. Эти последовательные заражения называются `пассажами'.  
Индикацию, т.е. обнаружение факта размножения вируса, устанавливают на основании развития типичных признаков заболевания, патоморфологических изменений органов и тканей животных или положительной реакции гемагглютинации (РГА). РГА основана на способности некоторых вирусов вызывать агглютинацию (склеивание) эритроцитов различных видов животных, птиц и человека за счет поверхностного вирусного белка - гемагглютинина.В настоящее время использование животных для культивирования вирусов ограничено.