Листерии

Способы ускоренной индикации в объектах внешней среды и в организме животного

Практически весь спектр современных методических подходов пытались использовать для ускоренного выявления листерий: иммунофлюоресценцию, иммуноферментный анализ, моноклональные антитела, радиоиммунологический метод, ДНК-зонды, ПЦР, проточную цитометрию и др. Однако в клинической диагностике листериоза они не нашли применения (Радчук, Дунаев, 1991).

Основная область использования экспресс-методов – выявление листерий в продуктах питания. Однако и здесь приоритет в соответствии с международными и национальными регламентами стран – экспортеров продовольствия принадлежит классической бактериологии, хотя в дальнейшем поиск новых высокоспецифичных антигенных и нуклеотидных маркеров может изменить ситуацию (Тартаковский, 2002).

При анализе клинического материала (ликвора, крови, околоплодной жидкости, плаценты) перспективно применение ПЦР с использованием праймеров на основе последовательностей гена листериозина О (hly) или фосфолипазы (plcA). Метод обладает высокой чувствительностью и позволяет выявить возбудитель в течение нескольких часов. Хотя фрагмент хромосомы, на котором расположены гены, кодирующие факторы патогенности L.monocytogenes, используемые в ПЦР, сходен с аналогичным фрагментом L.ivanovii и L.seeligeri, в наших экспериментах мы не наблюдали перекрестных реакций. Однако опыт применения ПЦР при анализе клинического материала недостаточен для практических рекомендаций по его использованию в качестве основного метода диагностики (Поздеев, 2006).

Медицинское и ветеринарное значение. Патогенность

Патогенные листерии обладают набором биологически активных молекул и белков (листериолизин О, фосфолипаза С, лецитиназа, интерналин, белки ActA и PrfA), позволяющим активно проникать и размножаться не только в фагоцитах, но и эндотелиальных и эпителиальных клетках. Способность перемещаться по цитоплазме клетки за счет полимеризации актина и переходить из клетки в клетку «продавливая» мембрану позволяет патогенным листериям легко преодолевать барьеры слизистой оболочки кишечника без контакта с антителами, комплементом и нейтрофилами. Поступая в кровяное русло возбудитель может перемещаться в главные места локализации поражая мозг и плаценту (Литвин, 1996).

Если раньше листериоз считали типичным зоонозом, при котором источником возбудителя инфекции являются различные животные, то в настоящее время его относят к сапрозоонозам, а основным источником и резервуаром возбудителя инфекции признаны объекты внешней среды, природные субстраты, в которых листерий способны размножаться — прежде всего почва. Листерий выделяют также из растений, силоса, пыли, водоемов и сточных вод (Кареткина, 2008).

Основной путь заражения человека листериозом — пищевой; люди заражаются при употреблении вышеперечисленных продуктов питания, не прошедших термической обработки. Повышенную опасность представляют мягкие сыры, а также продукты быстрого приготовления (“фаст фуд”)—сосиски "хот-дог", гамбургеры и др. Возможны также другие пути заражения: контактный (от инфицированных животных и грызунов), аэрогенный (в помещениях при обработке шкур, шерсти, а также в больницах), трансмиссивный (при укусах насекомых, в частности клещей), половой. Особое значение имеет возможность передачи листерий от беременной женщины плоду — либо во время беременности (трансплацентарно), либо при контакте новорожденного с родовыми путями родильницы (интранатально). Листерий могут быть причиной внутрибольничной инфекции. У животных возбудители в основном передаются алиментарпым путем; менее действенный путь передачи инфекции — трансмиссивный (при укусах клещей) (БМЭ,1980).

В человеческой популяции частота бессимптомного носительства листерий составляет 2—20%; из кала здоровых людей листерий выделяют в 5—6% случаев. В России ежегодно выявляется от 40 до 100 больных. В Москве в 1992 г. листериоз диагностирован только у 9 человек, в 1999 г. — у 23, в 2001 г. — у 25 (преимущественно у детей). По данным эпидемиологов, в Москве заражение происходит чаще всего (более чем в 50% случаев) контактным путем от инфицированных животных (собак, кошек) и грызунов, реже (около 30% случаев) — пищевым и перинатальным (около 15 %) путями. Заболеваемость носит преимущественно спорадический, реже — групповой характер (Кареткина, 2008).

Листерий проникают в организм человека через слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, глаз, половых путей, поврежденную кожу, передаются через плаценту плоду. При адекватной иммунной реакции организма, продукции достаточного количества субпопуляций Т-лимфоцитов, активации макрофагов дальнейшего продвижения листерий не происходит. В противном случае из входных ворот микробы могут распространяться гематогенно и лимфогенно (Черкасский, 2002).

Прогрессирование процесса вызывает некротические изменения в центре гранулем. В дальнейшем происходит организация некротических очагов, рассасывание некротизированных клеточных элементов с возможным рубцеванием. Специфические гранулемы могут быть в любых органах, но чаще всего обнаруживаются в печени. Листерий способны преодолевать гематоэнцефалический барьер, поражать как оболочки, так и вещество головного мозга, мозжечка, где развивается воспалительная реакция и нередко формируются субкортикальные абсцессы. При врожденном листериозе гранулематозный процесс носит генерализованный характер и трактуется как гранулематозный сепсис. При наружном осмотре новорожденного с листериозом выявляются множественные беловато-сероватые гранулемы диаметром 1—2 мм, в части случаев — сыпь на коже— папулезная с геморрагическим венчиком или розеолезная. На вскрытии умерших от листериоза все органы с поверхности или на разрезе как бы посыпаны "пшеном" — беловато-сероватые, серовато-желтоватые гранулемы обнаруживаются под плеврой, в легких, под капсулой печени и в ее ткани, в почках под мягкой мозговой оболочкой, в веществе головного мозга, в селезенке, лимфатических узлах, кишках желудке, надпочечниках, тимусе. Микроскопически в коже наблюдаются продуктивные васкулиты, очажки некроза в дерме с образованием гранулем, гиперемия. В печени выявляются множественные субмилиарные очаги некроза гепатоцитов с выраженной гиперплазией и пролиферацией звездчатых эндотелиоцитов, на месте которых формируются описанные гранулемы. При пероральном заражении животных в инкубационном и остром периодах находят возбудителя в групповых (пейеровых) бляшках, лимфатических фолликулах, в лимфатических узлах корня брыжейки и даже в печени и селезенке; отмечается поражение печени с некротическими очагами (Тимаков, 1983).

Необходимо раннее назначение антибактериальной терапии. При локализованной (железистой, гастроэнтеритической) форме используются ампициллин (амоксициллин), ко-тримоксазол, эритромицин, тетрациклин (доксициклин), левомицетин в средних терапевтических дозах. При генерализации инфекции (нервная, септическая формы), листериозе новорожденных рекомендуется сочетание ампициллина (взрослым — 8—12 r/сут; детям — 200 мг/кг/сут) или амоксициллина с гентамицином (5 мг/кг/сут) в течение всего лихорадочного периода и еще 3—б дней, а в тяжелых случаях—до 2—3 нед. с момента нормализации температуры. В случае неэффективности такой терапии необходимо заменить антибиотик с учетом чувствительности штамма листерии. выделенного от больного. При необходимости проводят инфузионную дезинтоксикационную, а также десенсибилизирующую и симптоматическую терапию, лечение сопутствующих заболеваний. Беременным назначают ампициллин. Женщине, родившей больного листериозом ребенка, проводят курс антибактериальной терапии ампициллином или доксициклином (2 цикла по 7—10 дней с интервалом в 1,5 мес) (Поздеев, 2006).

Профилактика листериоза включает в себя контроль за пищевыми продуктами, предусмотренный соответствующими нормативными документами; санитарно-просветительную работу среди населения, особенно в группах риска. Из рациона беременных женщин следует исключить продукты пищевой индустрии для быстрого питания, не прошедшие длительной термической обработки, а также брынзу, мягкие сыры и сырое молоко. Для профилактики листериоза новорожденных необходимо обследовать женщин с отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом, а также имеющих постоянный контакт с животными. Женщины с выявленным листериозом, клинически манифестным или бессимптомным, подлежат специфической терапии (Кареткина,2008).

Таким образом, в России, как и во многих других странах мира, в настоящее время заболеваемость листериозом растет, причем заболевают не только пожилые люди, лица с различными сопутствующими заболеваниями, но и молодые и здоровые. Листериоз характеризуется полиморфной клинической симптоматикой, поэтому пациенты могут обращаться к врачам разных специальностей (терапевтам, гастроэнтерологам, невропатологам, акушерам-гинекологам и др.). При своевременно начатой и адекватной анти-биотикотерапии болезнь излечима (Черкасский, 2002).

Экология и распространение

Листерии широко распространены во внешней среде. Встречаются в почве, воде, растениях. Чаще всего листерии выделяли из почвы тех полей, где травы не скашивались несколько лет, поскольку увядшая и разложившаяся трава способствует их размножению (Тимаков, 1983).

Способность листерий размножаться в почве зависит от температуры, содержания гумуса, влажности и величины pH. Листерии живут в достаточно широком температурном диапазоне (3-45 °С). Листерии — психрофилы, то есть, способны к активному размножению при низких температурах (4-10 °С). Поэтому их численность активно увеличивается весной и осенью, летом же в почве отмечается значительное уменьшение концентрации листерий. Зимнее промерзание почвы не оказывает отрицательного влияния на их жизнеспособность. Листерии требовательны к наличию в почве органических веществ. Они размножаются и длительно сохраняются в почвах с высоким процентом гумуса. В хвойных лесах они отсутствуют. Быстро погибают в пустынных и песчаных почвах. Водный баланс почвы также весьма важен для листерий. В кислых почвах листерии не размножаются, для них оптимальны значения pH, близкие к нейтральным (Поздеев,2006).

Листерии выделяют также из сточных вод, речной воды, ила, навозной жижи. Жизнеспособность листерий в воде зависит как от величины pH, так и от жёсткости воды. Листерии способны проникать в вегетативные органы растений через корневую систему и сохраняться там в высокой концентрации в течение месяца. Таким образом, листерии способны адаптироваться к существованию в широком диапазоне условий внешней среды. Им свойственна высокая метаболическая пластичность, способность перехода от сапрофитического образа жизни к паразитическому, и наоборот.

Заключение

Морфологически листерии представляют собой мелкие кокковидные палочки длиной 0,5—2 мкм и шириной 0,4—0,5 мкм, факультативные аэробы, хорошо, но не обильно развиваются на обычных нейтральных или слабощелочных (при рН 7,0—7,2) мясопептонных средах, пышно растут при добавлении в среды глюкозы или сыворотки. Листерии ферментируют глюкозу, каталазоположительны, оксидазоотрицательны, образуют цитохромы. Листерии некислотоустойчивы. Не образуют споры и капсулы, факультативные анаэробы, хемоорганогетеротрофы.

Практически весь спектр современных методических подходов пытались использовать для ускоренного выявления листерий: иммунофлюоресценцию, иммуноферментный анализ, моноклональные антитела, радиоиммунологический метод, ДНК-зонды, ПЦР, проточную цитометрию и др. Однако в клинической диагностике листериоза они не нашли применения.

Список литературы

1.  Литвин В.Ю., Емельяненко Е.Н., Пушкарева В.И. Патогенные бактерии, общие для человека и растений: проблемы и факты / В.Ю. Литвин , Е.Н. Емельяненко , В.И. Пушкарева // Микробиология, 1996.- №2.-С.76-83.

2.  Поздеев О.К. Медицинская микробиология / О.К. Поздеев – М.: FЭOTAP-Медиа, 2006.- с.302-310.

3.  Радчук Н.А, Дунаев Г.В. Ветеринарная микробиология и иммунология / Радчук Н.А, Дунаев Г.В.-М.: Агропромиздат,1991.-с.202-205.

4.  Тартаковский И.С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика / И.С. Тартаковский.-М.: Наука, 2002.- с.130-145.

5.  Тимаков В.Д., Левашев В.С. Микробиология / В.Д. Тимаков, В.С. Левашев.-М.:Медицина, 1983.- с.344-349.

6.  Черкасский Б.Л. Частная эпидемиология / Б.Л. Черкасский.-М.: «Интерсэн», 2002.- с. 354-359.

7.  БМЭ/ под редакцией Б.В. Петровского. - М.: Советская энциклопедия, 1980.- с. 200-205.

7