Бактериологическая диагностика мастита

Указанные выше стрептококки сходны между собой. Величина кокков 0,5-1 мкм в диаметре. Они неподвижны, спор и капсул не образует. Грамположительны. Не образуют пигментов. На агаре образуют мелкие, слегка мутные колонии. Желатин не разжижают, характерен гидролиз гипурата натрия (Streptococcus aqalactiae), свёртывают молоко Не ферментируют сорбит, дульцит. Для выяснения гемолитической активности используют САМР (КАМП). При отстое молока, полученного от больных коров, на дне сосуда оседает гной, фибрин и микробные клетки. В мазках из мастичного молока - Streptococcus mastitidis, наблюдается в виде коротких цепочек, заключенных в лейкоцитах, Streptococcus aqalactiae - в виде небольших скоплений; встречаются и диплококки. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Исследование  молока, на присутствие стафилококков 

Золотистый стафилококк (Staphilococcus aureus)  обнаруживаемый в маститном  молоке, - это сферический кокк диаметром 0,8-0,9мкм. Встречаются отдельные кокки, диплококки, короткие цепочки. Спор и  капсул не образует, неподвижный. Легко  окрашивается всеми анилиновыми  основными красками. Грамположительный, на всех обычных питательных средах растет в виде скоплений колоний  неправильной формы.

Оптимальная температура  для роста 34-37°С. Факультативный анаэроб. При посеве штрихом на МПА растет в виде желтого налета с блестящей  поверхностью. При росте на картофеле  интенсивно образует желтый пигмент. На кровяном агаре вокруг колоний выражена зона гемолиза. Незначительно разжижает  желатин. На МПБ дает равномерную  муть, среда приобретает коричнево-желтый оттенок. Хорошо растет на молоке, разлагает лактозу и вызывает свертывание молока. Содержит кислые протеазы, что вызывает пептонизацию сгустка.

При появлении колоний  с зеленым оттенком можно предположить наличие синегнойной палочки.

 

 

 

 

 

 

 

Для распознавания маститного молока ставят каталазную, лейкоцитную  и бромтимоловую пробы, проводят бактериологическое и бактериоскопическое исследование.

Каталазная проба. В каталазник Функе вносят 15мл молока подогретого до 250С и 5мл 1 %-ного раствора перекиси водорода. Жидкости перемешивают и внутреннюю трубку каталазника Функе вставляют так, чтобы уровень жидкости был на ее нулевом делении. Каталазник помещают в водяную баню при температуре 250С на 2ч. Отсчитывают высоту уровня жидкости, которая соответствует объему выделившегося кислорода. При выделении свыше 2 см3 кислорода молоко считается подозрительным на мастит.

Лейкоцитная проба. В центрифужные градуированные пробирки вносят по 10мл молока от каждой пробы и центрифугируют 5 минут при частоте вращения 1200 об/мин. При наличии в пробирке осадка, достигающего делений 0,5-1, молоко считается подозрительным; наличие осадка, достигающего делений 1 -2, указывает на молоко от маститных коров. При микроскопии осадка такого молока обнаруживается большое количество многоядерных лейкоцитов и стрептококков.

Бромтимоловая проба. В углублениях на фарфоровой пластинке 5 капель молока смешивают с I каплей 0,2%-ного раствора бромтимолового синего в 60 -ном спирте. Молоко, полученное от здоровых коров, окрашивается в желтый цвет (рН=1-6,3-6,5); от маститных - в зеленый (рН=6,5-7,0) и даже синий (рН=7,0-7,5). При тяжелых формах мастита реакция молока может быть кислой, и оно окрашивается в желтый цвет.

Проба отстаивания (проба Мутавина). Для проведения пробы из каждой доли вымени (соска) берут 10-15мл молока в пробирки и оставляют их в штативе при температуре 4-8°С. Пробирки просматривают через 2-Зч и вторично через 16-24ч, при этом определяют цвет молока, наличие осадка и примесей, высоту слоя сливок и их внешний вид. Маститное молоко бывает синеватым, водянистым. Слой сливок менее 0,5мм указывает на заболевание. Признаком заболевания является также розовый цвет сливок (наличие в них эритроцитов). Хлопья указывают на большое количество лейкоцитов.

Проба со щелочью. На предметное стекло наносят 5 капель молока, добавляют 2 капли 1Н раствора NaOH и смешивают в течение 20с. Если молоко доброкачественное, образуется прозрачная смесь, если маститное, наблюдаются хлопья и нити.

Также ставится биопроба

Биопроба ставится на двух белых мышах. Пробу вводят внутрибрюшинно по 0.2 мл маститного молока, так как  смывы с культур авирулентны. Зараженные мыши при положительном  результате в течении 6-7 дней после  заражения. Их вскрывают и из органов  готовят препараты для микроскопии, а также делают посевы из этих же органов. При микроскопии должны обнаруживаться такие же микроорганизмы что и в маститном молоке, а  в культурах из органов должен быть характерный рост как в культуре из маститного молока.

Для определения  чувствительности микроорганизмов  к антибиотикам  предоставляются  диски Синулокс и Кламоксил.

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам Используется метод диффузии в агар ( метод дисков ):

В стерильные чашки Петри  наливают по 20 мл расплавленной агаровой среды. На поверхность застывшей  среды наносят 1 мл бактериальной  взвеси испытуемой культуры.

 Покачиванием чашки  жидкость равномерно распределяют  по всей поверхности среды,  избыток отсасывают. Среду в некоторых  случаях можно засевать непосредственно  молоком, и растирать равномерно  по всей поверхности шпателем. Среду подсушивают в течении  30 мин при t=37°C.

 На поверхность засеянной  среды накладывают диски с  антибиотиками ( не класть два  сцепленных между собой диска  ). Диски раскладывают на равном  расстоянии один от другого  и на 2 см от края чашки. В  каждой чашке можно проверить  действие 4-5 антибиотиков. Чашки с  дисками выдерживают 2-3 часа при  комнатной температуре и затем  в течении 16-18 часов при t=37°C.

Чашки рекомендуется ставить  в термостат в перевернутом виде или вкладывать под крышку чашки  кружок фильтровальной бумаги. При  оценке результатов с помощью  линейки или измерителя и миллиметровой  бумаги определяют диаметр зон задержки роста микробов вокруг бумажных дисков (включая и диаметр самого бумажного  диска).

 

Степень чувствительности	Задержка роста при посеве на чашках	Величина рН молока с антибиотиками  после выдерживания в термостате
Устойчивые	Нет	Одинаковая с величиной рН молока без антибиотиков
Малочувствительные	До 15 мм	Имеет значительный сдвиг в кислую сторону, но не доходит до величины рН молока в пробирке без антибиотиков после выдерживания в термостате
Чувствительные	От 15 до 25 мм	Имеет незначительный сдвиг в кислую сторону
Высокочувствительные	Более 25 мм	Осталась без изменения

 

 

Хранить готовые диски  следует при комнатной температуре. Концентрации антибиотиков подбирают  таким образом, чтобы диаметр  зон задержки роста чувствительных тест-микробов равнялся для всех антибиотиков 28-32 мм. Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам  предоставляются диски Синулокс и Кламоксил.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Использование быстрых  маститных тестов

В настоящее время достаточно остро стоит вопрос об обеспечении  хозяйств диагностическими препаратами, приборами и другим вспомогательным  оборудованием, позволяющим в короткий срок поставить правильный диагноз  и назначить своевременное рациональное лечение.

Целью нашей работы было изыскание диагностических средств, выявляющих животных больных маститом. При этом в основном учитывают  изменения секрета молочной железы (молока).

Молоко представляет собой  сложную физико-химическую и биологическую  жидкость, которая сохраняет устойчивое равновесие элементов при нормальном их соотношении. При заболевании, связанном  с молочной железой, изменяется биохимический  состав молока, на чем и основана лабораторная диагностика лактирующих  коров.

Наиболее часто для  диагностики мастита используют димастин, мастидин и универсал, а  за рубежом — калифорнийский маститный  тест (КМТ), софия-тест, бернбург, рапид-тест, стара загора, шалм-тест и др. Однако в последнее время данные отечественные  препараты практически не выпускают.

При проведении экспериментов  брали во внимание быстрые маститные  тесты (БМТ), которые просты в исполнении и не требуют специального оборудования.

Считают, что препараты, состоящие  из поверхностно-активного вещества, индикатора и некоторых других компонентов, более эффективны, так как позволяют  учитывать сразу два показателя (плотность желеобразного сгустка  по количеству соматических клеток и  изменение pH среды по его цвету).

Согласно работам И. И. Архангельского, В. М. Карташовой, А. И. Ивашуры, Ю. А. Козырева, М. К. Оксамитного  и других ученых в предыдущие годы для диагностики мастита применяли  растворы бромтимолблау и 4 %-ного едкого натра (проба Уайтсайда). Их эффективность мы сравнивали с препаратами димастин, мастидин и сульфанол (контроль).

Опыт ставили на трех фермах крупного рогатого скота в АОЗТ племзавода «Заря Подмосковья» Домодедовского района Московской области. Испытывали пять тестов: с 5 %-ным раствором димастина, 2 %-ным раствором масти-дина, 1,25 %-ным  раствором универсала (сульфанола), 4 %-ным раствором едкого натра (проба  Уайтсайда) и с 0,5 %-ным спиртоводным раствором бромтимолблау.

Для постановки реакции с  димастином, мастидином и универсалом  к 1 мл молока добавляли 1 мл раствора; с  бромтимолблау — 2—3 капли реактива; пробы Уайтсайда — 0,2 мл 4 %-ного раствора едкого натра.

Животных с клинической  формой мастита, которую выявляли визуально  по изменению состава молока с  использованием молочно - контрольных  пластинок, исключали. Отобрали 1980 проб молока от 480 лактирующих коров.

После их исследования с  пятью вышеуказанными реактивами в 84 случаях получили положительные  результаты. Пробы Уайтсайда совпадали  с мастидином на 96,5 %, с димастином — на 87,0, с универсалом — на 91,0 и с бромтимолблау — на 86,0 %.

Пробы молока, реагирующие  на быстрые маститные тесты, дополнительно  проверяли бактериологически и  пробой отстаивания. Из 84 проб 39 (46,4 %) по пробе отстаивания были также  положительными. При бактериологическом исследовании культуры золотистого  стафилококка выделили в 56 пробах, агапактийного  стрептококка — в 11 и смешанной  микрофлоры — в 3 пробах. Так как  в оставшихся 14 пробах молока основных возбудителей мастита не зарегистрировали, провели повторные опыты. В результате у 5 коров выделили эпидермальный  стафилококк.

На основании полученных данных животных классифицировали следующим  образом: с предклиническим состоянием вымени (положительные мас-титный тест и проба отстаиваниявыделили  возбудителя); со скрытой формой мастита (положительный маститный тест и  выделили возбудителя); с нарушенной секрецией молочной железы (положительный  маститный тест).

Коровам с предклиническим  состоянием и скрытой формой мастита  назначали аципол, с нарушением секреции вымени — частое сдаивание.

Пробу Уайтсайда можно  рекомендовать в качестве диагностического теста при мастите коров. Она  высокоэффективна и доступна для  каждой молочной фермы и частного предпринимателя.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Противомаститные  препараты

Маститами поражаются коровы в любой период лактации, при этом чаще заболевают высокопродуктивные животные. Основные потери молока происходят во время болезни и в последующий  период выздоровления. У части животных из-за длительного лечения происходят необратимые изменения ткани  молочной железы, и прежние удои вообще не восстанавливаются. Более 20 % коров выбраковывают после переболевания  маститом из-за атрофии одной или  нескольких четвертей вымени. Поэтому  по статистике потери молока от переболевания  маститом составляют в среднем 10—15 % годового удоя. Таким образом, при  среднегодовом удое 3000 л молока при  заболевании маститом хозяйство  недополучает 300—450 л молока в год  от каждой заболевшей коровы. При средней  закупочной цене молока 14 руб./л хозяйство теряет из-за переболевания маститом каждого животного от 12000 до 18000 руб. в год. Экономический ущерб от маститов складывается еще и из снижения на 2—3 года средней продолжительности продуктивной жизни коровы, недополучения соответственно 2—3 телят и удоя от 2—3 лактаций. Даже незначительная примесь молока от больных маститом делает непригодной всю партию молока для переработки на сыры и кисломолочные продукты. Молоко от больных скрытым маститом коров вызывает желудочно-кишечные болезни у телят.

Важнейшим направлением в  борьбе с маститами является лечение  животных. Именно быстрая и эффективная  терапия позволит максимально снизить  потери молока, полностью восстановить молочную продуктивность и не допустить  развития необратимых явлений в  пораженных долях вымени и последующую  выбраковку животного.

В данной главе рассматриваются  новый разработки препаратов против маститов.

 

Мультимаст — комплексный  антимикробный препарат в виде суспензии  в одноразовых шприцах инъекторах для внутри выменного введения. Обладает мощным бактерицидным и противовоспалительным действием благодаря содержанию 3 антибиотиков с синергидным эффектом: неомицина, пенициллина и окситетрациклина, а также преднизолона. Неомицин — бактерицидный антибиотик, особенно активный в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий, в том числе пенициллиноустойчивых. Пенициллин оказывает бактерицидное действие на грамположительные бактерии — стрептококки и стафилококки, а также некоторые грамотрицательные. Окситетрациклин усиливает эффект неомицина и пенициллина, значительно расширяя спектр их действия на микоплазмы, хламидии и риккетсии. Все три антибиотика действуют последовательно на разные стадии развития бактерии — пенициллин нарушает синтез клеточной оболочки, неомицин и окситетрациклин препятствуют синтезу белков в бактериальной клетке. Благодаря этому мультимаст сохраняет активность даже в отношении бактерий, резистентных ко всем трем препаратам. Преднизолон снижает воспалительную реакцию за считанные часы и в то же время не оказывает отрицательного действия на активность фагоцитов в очаге воспаления.